如何设计引物？
故宫的雪Snow 最后，对生成的反向互补序列执行与正向引物相同的操作步骤，选择前24个碱基如TCAAAGATCTACCATGTACAGCTC，确认其Tm值为57.6度符合标准，至此正向和反向引物均设计完成，可将序列提交给公司进行合成。
故宫的雪Snow 评论 (2)
实操干货，简洁明了。
步骤很清楚，不过Tm值57.6度其实处于引物设计的边缘，通常建议控制在58-62度之间更稳妥，特别是对于高GC含量的模板。另外，提交合成前最好再仔细检查一下反向互补序列的方向，避免因为互补链取错导致后续PCR失败，毕竟合成挺贵的。