如何设计引物？
深海鱼酱 接着启动DNAMAN软件，通过Primer菜单下的Load Primer功能，从输入端粘贴目的基因开头约20个碱基，比如ATTGATGTGATATCTCCACT，此时需确保引物长度控制在15到30bp之间，常用范围是18-27bp，然后点击OK检查初步可行性。
深海鱼酱 评论 (3)
光粘过去可不行，后续还得调Tm值、GC含量这些关键参数呢。
这里有个关键点没提，直接粘进去OK就行？DNAMAN其实挺挑格式的，有时候序列里混了空格或者特殊字符会报错，建议先用文本编辑器清理一下。另外，18-27bp只是起步价，真正好用的引物还得看Tm值和GC含量，光看长度不行，最好跑个二级结构预测。
楼上说的DNAMAN确实经典，不过现在大家好像更爱用Primer5或者NCBI的Primer-BLAST了，毕竟DNAMAN好久没更新了，界面看着有点复古。另外提醒一下，虽然15-30bp是理论范围，但实际做PCR的话，最好还是控制在18-22bp最稳妥，太长容易形成二级结构，影响扩增效率。还有别忘了检查Tm值，两个引物的Tm值最好相差不超过5℃，不然容易扩不出来。