如何设计引物？

如果初步测试显示Tm值过低，如上述20个碱基的Tm仅为49度，则需要增加碱基数，例如尝试前24个碱基，查看其Tm值为60.3度，这是一个非常合适的数值，确认后即可将这段24个碱基序列保存，完成正向引物的设计。